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ELISA試劑盒的操作要點
更新時間:2019-07-12   點擊次數(shù):1468次

ELISA試劑盒實驗因多重優(yōu)勢在免疫學(xué)查驗中得到廣泛運(yùn)用,急速打開。那么ELISA試劑盒所具有的高特異性優(yōu)勢有哪些呢?

ELISA試劑盒的操作要點:

ELISA試劑盒實驗通常為選用手工操作的以微孔板條為固相的測定形式,ELISA試劑盒測定操作十分簡略,一般涉及到標(biāo)本的搜集保存、試劑準(zhǔn)備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、成果判別和成果陳述及解說等方面,其間任一進(jìn)程的不當(dāng)都會影響測定成果,且尤以加樣、溫育和洗板等進(jìn)程為甚。ELISA試劑盒正確的加樣辦法應(yīng)為45度,吸頭貼著孔壁參加,應(yīng)留心視點太小,會使液體殘留在孔壁上,導(dǎo)致加樣不;吸頭應(yīng)當(dāng)貼著管壁和液面的交界處!

特異性:指ELISA試劑盒正確檢定不存在的被檢物質(zhì)的才干(無假陽性),取決于包被抗原(體)及符號抗原(體)的純度及特異性。

安穩(wěn)性:大鼠elisa試劑盒在規(guī)矩條件下能儲存的時刻,一般選用破壞性實驗行將試劑存放于37℃保存,守時測定其靈敏度,特異性和精密度等政策,直到其質(zhì)量政策開端下降間斷,一般以為37℃每安穩(wěn)一天相當(dāng)于4-10℃保存一個半月。

簡便性:ELISA試劑盒指在不影響試劑的前三項政策的前題下,實驗和測定進(jìn)程越少越好,在定性實驗中作用判別簡略清楚,定量實驗作用核算也應(yīng)簡略。 受辦法學(xué)及技能條件的束縛,在酶聯(lián)免疫吸附測定中有時不行防止的會呈現(xiàn)必定的非特異性,我們可以通過以上辦法把非特異性顯色降至zui低限底,然后跋涉檢測的特異性,并得到更、可靠的實驗作用。

凍住血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,散布不均,應(yīng)充沛混勻宜輕緩,防止氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上劇烈振蕩。混濁或有堆積的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,弄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價下跌,所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作屢次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自搜集時就應(yīng)留心無菌操作,也可參加適當(dāng)防腐劑。

血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均平等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只需待血清天然凝固、收縮后即可取得。除特殊情況外,在醫(yī)學(xué)檢驗中均以血清作為檢測標(biāo)本。在大鼠ELISA試劑盒中血漿和血清可平等運(yùn)用。血清標(biāo)本可按常規(guī)辦法搜集,應(yīng)留心防止溶血,紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為符號的ELISA試劑盒測定中,溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。

血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會發(fā)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久,其間的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存。

 

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