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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)知識培訓(xùn)
更新時(shí)間:2014-05-23   點(diǎn)擊次數(shù):1073次

    在做ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)過程中,難免會遇到各種不同的問題,比如標(biāo)準(zhǔn)曲線不好,試劑盒的回收率,假陰性,假陽性,實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性不好等等?,F(xiàn)在就來一一解答用戶們在實(shí)驗(yàn)過程中遇到的各種疑問!
ELISA試劑盒曲線問題: 

1.OD值不正常

試劑盒未回溫,試劑盒回溫到25℃

溫度控制不好,控制正確溫度

孵育時(shí)間不準(zhǔn)確,控制孵育時(shí)間

洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過長、洗滌次數(shù)增 加,洗滌4-5次,每孔250ul,然后拍干

陽光直射,對著風(fēng)直接吹,避風(fēng)避

酶標(biāo)儀的波長錯誤,酶標(biāo)儀的波長450nm

抗體的稀釋錯誤,正確的稀釋抗體

水質(zhì)問題,用娃哈哈礦泉水代替

2.白   板

洗滌液配制錯誤,正確的配制洗滌液

少加液體(錯加液體),正確的步驟加液體

3.無 梯 度

標(biāo)準(zhǔn)品也污染,換標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)板

OD值不正常,控制溫度時(shí)間在做一次

人為點(diǎn)板,不要點(diǎn)板

4.線 性 不 好

OD值不正常,控制溫度時(shí)間在做一次

ELISA試劑盒回收率

1.空白管陽性高

樣本本身就是陽性樣本,換陰性樣本做回收率

空白管在實(shí)驗(yàn)中被污染,實(shí)驗(yàn)中防止交叉污染

水質(zhì)原因用,娃哈哈礦泉水代替

2.偏  高

添加量不準(zhǔn)確,的添加量

添加濃度不適合,添加合適的濃度

取液吹干量多,準(zhǔn)確的取液吹干

取到其它相層液體,取需用相吹干

復(fù)溶液未稀釋或加入量少,正確的稀釋復(fù)溶液

3.偏  低

添加量不準(zhǔn)確,的添加量

添加濃度不適合,添加合適的濃度

取液吹干量少,準(zhǔn)確的取液吹干

復(fù)溶液稀釋錯誤或加入量多,正確的稀釋復(fù)溶液

假陰、陽性

1,水質(zhì)原因:點(diǎn)復(fù)溶液驗(yàn)證,用娃哈哈礦泉水代替

2,實(shí)驗(yàn)操作原因

吸取到其它相吹干,準(zhǔn)確的取液吹干

離心不*,延長離心時(shí)間

樣本的污染,更換樣本

乳化未處理*,溫浴(70℃)處理乳化現(xiàn)象

3,儀器試劑原因

離心管未清洗干凈,ELISA試劑盒正確的洗滌器具

有機(jī)溶劑的影響,做試劑空白看影響結(jié)果

4,衍生化試劑原因(長時(shí)間衍生化試劑變質(zhì)),更換衍生化試劑

5,與曲線好壞相關(guān),,保證曲線的正常

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